钙螯合剂BAPTA, AM

BAPTA, AM是一种细胞内钙离子选择性螯合剂。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成BAPTA，从而被滞留在细胞内。BAPTA基本的螯合单位和EDTA类似，只是两个脂肪氮被芳香氮所替代。因此，BAPTA在生理pH下不会被质子化。BAPTA的pKa3为5.47，pKa4为6.36。这个特点显示了去质子化的步骤并不包含在钙的螯合步骤中。由于不受质子的干扰，它的螯合率比EGTA高很多。

使用方法

（1） 溶解方法

将25mg BAPTA, AM加入到 654μL无水DMSO中，配制50 mM stock solution。

保存stock solution的方法和保存时间^*：

A、由于AM体遇水容易分解，所以我们推荐现配现用。

B、使用无水DMSO，在冷冻的条件下，可以保存约1～2个月。

（2） 使用方法

稀释stock solution，添加细胞。

稀释浓度：少的 6～8 μM，多的50 μM

*  由于BAPTA, AM是非水溶性，稀释时先再添加DMSO后，添加水溶液（特别是使用培养液时）。不然的话，BAPTA, AM的结晶有可能出来。关于添加的DMSO的量，考虑细胞的毒性，应该低于1%以下。

*  由于BAPTA, AM是非水溶性，所以稀释时慢慢添加水溶液。

*  如果不想再添加DMSO的话，也有添加Pluoronic F127的方法。添加Pluoronic F127时，先添加到母液后，使用PBS等水溶液稀释。

*  stock solution和PBS等水溶液混合时，将stock solution添加到PBS等水溶液里。

 例1) 10 μM，使用2 μL 50 mM BAPTA, AM stock solution

         再添加的DMSO量：0μL（DMSO最终浓度：0.02 %）

         添加的水溶液的量：10 mL

     　方法：2 μL BAPTA, AM stock solution +10 mL PBS等水溶液

 例2) 25 μM，使用5 μL 50 mM BAPTA, AM stock solution

         再添加的DMSO量：95 μL（DMSO最终浓度：1%）

         添加的水溶液的量：10 mL

     　 方法：(1) 5 μL BAPTA, AM stock solution + 95 μL DMSO

                    (2) 10 mL PBS等水溶液 + 100μL 的(1)

关于细胞的量，不同的细胞使用不同的细胞量。一般来说，Fura-2, AM及Fluo-3, AM一样的量^*。

论文里面有如下的条件，请参考。

例1) 1.75×10-4 cells/cm2，25 μM BAPTA, AM

培养时间：20～60 分钟

* 如果培养时间太长的话，很多BAPTA, AM进入细胞内，对细胞不好（毒性高）。